方法汇总

一、 液体样本

液体样本处理原则：所有的液体样本，用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），如果以后碰到其他的液体样本，也按这个方法，纳入汇总表。

1、血清：用无菌管收集，室温血液自然凝固 10-20 分钟，2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2、血浆：应根据标本的要求选择 EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3、尿液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

4、胸腹水：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）， 仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5、脑脊液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）， 仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6、唾液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

7、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

8、牛奶：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

9、蜂蜜：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

10、全血：用含有抗凝剂的无菌管收集，立即轻轻摇动，来回轻轻颠倒数次，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固。

二、 固体样本

固体样本处理原则：称取 1g 的固体样本，用 9g 的合适缓冲液溶解，分泌蛋白可以直接离心取上清检测，细胞内的蛋白，要先收集细胞，再用合适方法破碎，离心取上清测试。

1、组织标本：切割标本后，称取 1g 组织，加入 9g 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS， 用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），仔细 收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。对于植物组织，不好匀浆的话，就在液氮中充分研磨；

2、细胞内蛋白样本

许多待测蛋白不是分泌蛋白，而是存在于细胞内的蛋白，这个时候，要先收集细胞，洗涤干净，再破碎细胞，离心取上清。

（1）培养的细胞

A、动物细胞：用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀释细胞悬液，使细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融（如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎），以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

B、植物细胞：用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀释细胞悬液，使细胞浓度达到 100 万/ml 左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎 2s，冷却 30s 的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）组织的细胞

切割标本后，称取 1g 组织，加入 9g 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），去除上清， 再用 pH7.2-7.4 左右的 PBS 小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。

3、咽拭子：加入 2g 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS，溶解咽拭子头部，摇匀，用镊子取出咽拭子并挤干液体，2-8℃条件离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。

4、植物标本的精采集及保存 1、称取 0.1g（误差±3以内）新鲜植物组织样本， 在液氮中充分研磨；2、加入 1ml 的提取液（80甲醇）, 置于-20 度过夜；3、于4 度，8000rpm，离心 1 小时，取上清；4、 上清液过 C-18 固相萃取柱。具体步骤是：80 甲醇（1ml）平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用 100甲醇（5ml） 洗柱→100 乙醚（5ml）洗柱→100 甲醇（5ml）洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干，保存备用；5、上样前加入 pH7.4 PBS 缓冲液（1ml 定容）。混匀后室温放置 30 分钟，然后 4 度离心（8000rpm，15 分钟），取上清并暂时 保存于 4 度待用。

5、植物标本中相关酶或蛋白的测定：（粗提取）1、 新鲜植物组织请在液氮中充分研磨；2、 加入样品体积 9 倍的提取液（pH 7.4 PBS 缓冲液）,3、 请于 4 度，8000rpm，离心 30 分钟，取上清并暂时保存于 4 度待用。

样本收集注意事项

1、不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2、标本采集后尽快进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存， 但应避免反复冻融。

3、我们罗列的是通用的样本处理方法，无法涵盖各种样本，对于一些特殊样本， 建议实验人员多参考已发表的文献，自行设计合理的样本处理方法。

计算方法示例

绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。将样本的 OD 值为 X 值代入方程式，所得的 Y 值即是我们的样本值。（如下图所示）